细胞培养上清 细胞因子检测 样本处理方法

一、采样时机与基础准备

1. 待细胞培养至目标时间点，轻柔吸取上清，避免吸起细胞、细胞碎片。

2. 全程低温操作，优先冰上处理，减少细胞因子降解。

3. 提前备好离心管、冻存管、移液枪，耗材无内毒素、无蛋白酶污染。

二、离心去除杂质（核心步骤）

1. 将收集的培养上清转移至离心管，4℃、3000–4000 rpm 离心 10–15 min。

2. 目的：沉淀悬浮细胞、死细胞及碎片，防止干扰检测、堵塞检测板孔。

3. 离心后小心吸取上层清亮液体，切勿触碰底部沉淀。

三、分装与标记

1. 按单次实验用量分装（建议50–200 μL / 管），避免反复冻融。

2. 管壁清晰标注：样本名称、组别、采样时间、处理日期。

四、保存条件

1. 短期保存（1–3 天内检测）

2. 长期保存（超过 3 天）

• 立即放入 -20℃ 冷冻；长期存放（1 个月以上）建议 -80℃。

• 严格避免反复冻融，反复冻融会大幅降低细胞因子浓度，造成结果偏差。

五、检测前复融处理

1. 取出冻存样本，室温自然融化，禁止水浴高温加热。

2. 融化后短暂轻柔颠倒混匀，再次 4℃、3000 rpm 短时离心 3–5 min，去除解冻析出的微量杂质。

3. 混匀后即可上机 / 加样检测。

六、关键注意事项

1. 若培养液含血清、酚红：常规 ELISA 等免疫检测一般不受影响；部分高灵敏度试剂盒建议设置对应空白对照。

2. 全程避免剧烈震荡、泡沫过多，部分细胞因子易失活。

3. 样本出现浑浊、絮状沉淀、变色，建议废弃。

4. 如需运输样本：干冰低温运输，保证全程冷冻状态。

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