神经元细胞培养|实验技术服务

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神经元细胞培养|实验技术服务——pCzn1质粒+Arctic Express宿主菌低温表达体系。
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产品品牌：      
测序实验流程：
实验方法原理     SD胎鼠脑皮层神经元体外培养7 d，微量移液器塑料滴头于培养孔内机械性划割培养之神经元，依划割程度不同分为轻、中、重3组，对照组除不进行机械性划割，其余处理同损伤组，伤后不同时间点（10，30min ， 1，3，6，12，24 h）检测细胞存活率及培养液上清乳酸脱氢酶(LDH)含量。
实验材料    SD大鼠
试剂、试剂盒    硼酸硼砂缓冲液胰酶-EDTA 消化液D-Hanks’
仪器、耗材    眼科剪滴管离心机培养皿 CO2培养箱
实验步骤    
1. 孕16 d SD 大鼠经戊巴比妥钠麻醉后，碘酒、75%乙醇消毒腹部皮肤，依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜，无菌操作下取出胚胎放入预冷的 D-Hanks’平衡盐液中。
2. 在解剖显微镜下分离并取出胚胎大脑皮层，除去脑膜，剪碎组织成约1mm3 大小，加入胰酶-EDTA 消化液并放入 37℃孵箱内消化20 min，中间摇晃一次。
3. 随后用滴管吸出组织转移到装有预冷的培养液(DMEM＋10%FBS)的离心管内终止消化液作用5 min。
4. 用滴管吸出组织转移到装有预冷的 DMEM＋10%FBS 的离心管内，用火焰抛光的巴斯德滴管吹打数次，静置后取上清吸到另一支离心管内。重复上述步骤 2～3 次。
5. 将所收集的上清经200 目筛网过滤。
6. 过滤后的细胞悬液于800 rpm 离心5 min，弃上清，管内加入新鲜培养液(DMEM＋20%FBS)并吹打 成单细胞悬液。
7. 细胞计数，调整细胞密度按1.5×105/cm2  种入6 孔板内，放入CO2 孵箱中培养。培养48 h 后换液并 加入Ara-C使其终浓度为 1×10-5 mM/L。Ara-C作用24 h 后全量换液。以后每隔 3 天半量换液一次。