核因子相关κB结合蛋白65ELISA试剂盒

检测原理

试剂盒特点

• 特异性强：采用高特异性的双抗体夹心设计，捕获抗体与检测抗体均针对目标蛋白的不同表位，可特异性识别目标蛋白，有效避免样本中其他蛋白、杂质的交叉反应，检测特异性高，结果准确可靠，可有效区分目标蛋白与其他同源蛋白，适配复杂样本检测需求；

• 灵敏度高：优化抗体浓度与孵育条件，检测灵敏度可达pg/ml级别，可精准检测样本中微量的目标蛋白，能够捕捉到样本中目标蛋白的细微浓度变化，满足低表达样本的检测需求，适配炎症反应等微量蛋白调控相关实验研究，尤其适用于NF-κB信号通路活化相关的微量蛋白检测；

• 操作简便：试剂盒包含检测所需全部试剂，无需额外配制复杂试剂，实验步骤清晰，全程可在酶标板上完成，孵育时间优化设计，无需特殊实验技能，经简单培训即可上手操作，适配常规实验室及科研新手使用，大幅节省实验时间与人力成本；

• 检测范围宽：标准品浓度梯度合理，检测范围覆盖pg/ml至ng/ml级别，可适配不同浓度范围的样本检测，无需对样本进行过度稀释，减少稀释过程带来的误差，同时可避免因样本浓度过高或过低导致的检测结果偏差，提升实验重复性；

• 兼容性好：可适配血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等多种常见科研样本类型，无需复杂样本预处理，同时兼容常规酶标仪，无需额外配备专用检测设备，适配多类型科研实验设计，尤其适用于炎症性肠病、肿瘤等相关疾病的样本检测研究，可与细胞实验、分子生物学实验协同使用，为NF-κB信号通路相关研究提供全面支撑；

• 稳定性高：试剂盒试剂经严格质量控制，批内与批间变异系数低，试剂稳定性好，冷藏储存条件下可稳定保存，避免因试剂不稳定导致的检测结果波动，保障实验数据的重复性和可靠性，适合长期科研实验使用。

适用实验场景

• 信号通路研究：NF-κB信号通路活化机制研究，检测不同干预条件（如药物处理、细胞刺激、基因调控）下，样本中目标蛋白的含量变化，探究其在信号通路中的调控作用，为信号通路机制研究提供精准定量数据支撑；

• 疾病机制研究：炎症性疾病、肿瘤、自身免疫性疾病等相关机制研究，检测病变组织、血清样本中目标蛋白的表达水平，分析其与疾病发生、发展的关联，为疾病病因探究及防治提供实验依据；

• 药物研发实验：抗炎、抗肿瘤、信号通路抑制剂等药物的筛选与药效评估，检测药物干预后样本中目标蛋白的含量变化，判断药物对目标蛋白的调控作用，为药物研发、剂量优化提供体外检测平台；

• 基础科研实验：细胞生物学、分子生物学相关基础实验，如细胞刺激后目标蛋白表达变化检测、基因沉默/过表达后目标蛋白含量检测，适配多种科研设计，为实验结论提供定量支撑；

• 样本筛查实验：大批量科研样本的目标蛋白快速筛查，可同时检测多个样本，高效完成定量分析，适配大规模实验研究，节省实验时间，提升实验效率。

试剂盒组成与储存

（一）试剂盒组成

（二）储存条件

• 试剂盒未开封时：置于2-8℃冷藏储存，避免冷冻、高温（超过30℃）及强光直射，严禁反复冻融，确保试剂活性，未开封试剂盒保质期为12个月；

• 试剂盒开封后：包被抗体微孔板密封后2-8℃冷藏保存，避免受潮、污染，建议1个月内使用完毕；酶标检测抗体、底物液、终止液等试剂，密封后2-8℃冷藏，开封后建议2周内使用完毕；

• 标准品：冻存于-20℃以下，避免反复冻融，溶解后可在2-8℃冷藏保存3-5天，长期保存需分装后冻存；

• 洗涤液（浓缩型）：2-8℃冷藏保存，开封后密封，避免污染，稀释后使用，稀释后的洗涤液可在4℃保存1周；

• 运输条件：采用冰袋低温运输（2-8℃），运输过程中做好防震、防破损措施，运输时间不超过48小时，接收后立即检查试剂盒完整性，快速转入2-8℃冷藏储存。

实验操作步骤

注意事项

• 本试剂盒仅用于科研，严禁用于临床诊断、诊疗及其他非科研用途，实验过程中需严格遵循无菌操作规范，避免试剂污染、样本交叉污染，同时遵循科研实验伦理要求，规范处理废弃试剂、样本及实验耗材；

• 实验前需仔细阅读本说明书，严格按照操作步骤、孵育时间、温度及试剂用量进行操作，避免因操作不当导致检测结果偏差，尤其注意孵育温度的控制（严禁低于35℃或高于39℃），适配试剂反应特性；

• 所有试剂使用前需恢复至室温并轻轻摇匀，避免剧烈震荡，酶标检测抗体、底物液等试剂避免反复冻融，防止试剂活性下降；浓缩洗涤液需按比例稀释后使用，未稀释的浓缩液不可直接加入微孔板；

• 样本处理：血清、血浆样本需离心去除杂质（3000rpm，10分钟），避免溶血、浑浊样本使用；组织匀浆样本需按常规方法制备，离心去除沉淀后取上清液用于检测；细胞培养上清液需离心去除细胞碎片，确保样本纯净，避免杂质影响检测结果；

• 加样操作：移液器需校准，加样时避免气泡产生，加样量精准控制，不同样本、试剂需使用专用移液器吸头，避免交叉污染；加样后需轻轻震荡混匀，确保试剂与样本充分接触；

• 洗涤操作：洗涤次数、洗涤液用量需严格遵循说明书要求，避免洗涤不彻di（导致背景信号过高）或过度洗涤（导致抗原-抗体复合物脱落，检测结果偏低）；zui后一次洗涤后需彻di拍干残留液体，避免残留洗涤液稀释底物液；

• 显色反应：底物液需避光保存，显色过程需避光孵育，避免强光照射导致显色异常；显色时间可根据实际显色情况适当调整，但不可超过25分钟，防止显色过度影响检测结果；

• 终止与检测：终止液加入后需立即测定OD值，避免放置时间过长导致溶液颜色褪色，影响检测准确性；酶标仪需提前校准，测定时波长设置准确（492nm），确保检测数据可靠；

• 实验所用器材（移液器、离心管、微孔板等）需清洁、无菌，避免污染；实验结束后，废弃试剂、样本及实验耗材需经灭菌处理后丢弃，避免生物污染，符合科研实验安全规范；

• 若检测结果异常（如标准曲线线性差、样本OD值超出检测范围），可排查试剂活性、样本处理、操作步骤等因素，针对性优化实验条件（如重新稀释样本、更换试剂），必要时重复实验，确保实验数据可靠。

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